本公司生產(chǎn)的Pfu DNA Ploymerase是從克隆有Pyrococcus furiosis DNA Ploymerase基因的大腸桿菌中表達(dá)并經(jīng)過柱純化分離出來的重組蛋白，其分子量為90kDa。由于Pfu酶具有3’→5’核酸外切酶活性，它能糾正DNA擴(kuò)增過程中產(chǎn)生的錯配，而傳統(tǒng)的Taq酶卻不能，其它耐熱DNA Polymerase如Vent、Deep Vent、Tli、UITma等雖具有校正功能，但Pfu酶是目前已發(fā)現(xiàn)的所有耐DNA Polymerase中出錯率低的。Pfu酶無5’→3’核酸外切酶活性，PCR反應(yīng)中的延伸速度一般為0.5-1kb/分鐘，比Taq酶要低。Pfu 酶比Taq酶熱穩(wěn)定性更好，95℃ 1小時仍保持90%以上的活性，對于GC含量很高D的模板，變性溫度可以提高到98℃而不影響其活性。Pfu酶的PCR產(chǎn)物為平末端，可加A處理再與T-載體連接或使用平末端克隆載體。一般用于DNA的高保真擴(kuò)增，如基因表達(dá)克隆、基因定點(diǎn)突變、細(xì)胞內(nèi)基因點(diǎn)突變分析(SNP)和末端補(bǔ)平等。活性定義：1單位(U) Pfu DNA Polymerase活力定義為在74℃，30分鐘內(nèi)，以活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，將10nmol脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質(zhì)所需的酶量。質(zhì)量控制檢測：SDS-PAGE檢測Pfu DNA Polymerase純度大于99%；經(jīng)檢測無外源核酸酶活性 |
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